Citofluorimetria
Il Flow Cytometry Core Facility garantisce l’ottimale configurazione, manutenzione e prestazioni degli strumenti. Il personale della facility fornisce consulenza esperta sulla preparazione dei campioni, sul design dei pannelli e sulle strategie di gating.
Analisi dei dati & software
- Kaluza
- FlowJo
- FCS Express
- SpectroFlo
- FACSDiva
Identificazione delle sottopopolazioni cellulari
La facility è specializzata nell’identificazione di sottopopolazioni cellulari a partire da diversi campioni umani e murini, tessuti e colture 3D (sferoidi, organoidi, co-colture) mediante colorazioni multiparametriche. Queste includono:
- Subpopolazioni immunitarie (Treg, Tnaive, Tconv, GC Bcell, Bcell naive, TIL, TAM…)
- Cellule staminali tumorali (ALDH, Cd44/Cd24)
- Cellule endoteliali
- Cellule di mieloma
- Fibroblasti cardiaci
Analisi del ciclo cellulare e proliferazione
Saggi di citometria a flusso per l’analisi del ciclo cellulare e della proliferazione in cellule di mammifero e di lievito mediante:
- Propidium Iodine
- Sytox
- BrdU
- EdU
- FUCCI
- Cicline
- Ki67
Analisi del metabolismo cellulare
- Assorbimento del glucosio (2NDBG)
- Visualizzazione dei lipidi (Bodipy) e delle lipid droplets (Nile Red)
- Funzionamento dei mitocondri (JC1, Mitotracker, Mitosox)
- Rilevamento di proteine intracellulari (TMR HaloTag)
- Rilevamento di specie reattive dell'ossigeno (CellRox, DFCDA)
- Monitoraggio del rapporto ATP/ADP (sensore Perceval)
Analisi della morte cellulare/apoptosi
- Caspase3
- AnnV\PI
- DRAQ7
Analisi delle proteine fluorescenti e del gene editing
- Analisi di linee cellulari transdotte, trasfettate o ingegnerizzate con CRISPR/Cas9 o cellule primarie (umane e murine)
- Detezione di proteine fluorescenti (GFP, RFP, mCherry, Scarlet, Tomato, YFP…)
- Lineage tracking con marcatura RGB barcoding
- Analisi dell'interazione proteica (kit Duolink flowPLA®)
- Analisi dell'endocitosi cellulare (assorbimento di destrano)
- Analisi dell'assorbimento di microplastiche in diverse linee cellulari e in tessuti murini
- Quantificazione di antigen bound per cell (ABC) tramite QuantiBrite™ beads
Sorting
- Sorting bulk
- Sorting su supporti speciali per successive analisi (vetrini per imaging, piastre da 96 wells per screening/sequenziamento/spettrometria di massa/high content imaging)
- Sorting di singola cellula in piastre da 96 o 384 wells
- Sorting con precauzioni particolari per analisi metabolomiche/analisi NGS
