Citofluorimetria

Il Flow Cytometry Core Facility garantisce l’ottimale configurazione, manutenzione e prestazioni degli strumenti. Il personale della facility fornisce consulenza esperta sulla preparazione dei campioni, sul design dei pannelli e sulle strategie di gating. 

• Kaluza 
• FlowJo 
• FCS Express 
• SpectroFlo 
• FACSDiva

La facility è specializzata nell’identificazione di sottopopolazioni cellulari a partire da diversi campioni umani e murini, tessuti e colture 3D (sferoidi, organoidi, co-colture) mediante colorazioni multiparametriche. Queste includono:

• Subpopolazioni immunitarie (Treg, Tnaive, Tconv, GC Bcell, Bcell naive, TIL, TAM…)
• Cellule staminali tumorali (ALDH, Cd44/Cd24)
• Cellule endoteliali
• Cellule di mieloma
• Fibroblasti cardiaci 

Saggi di citometria a flusso per l’analisi del ciclo cellulare e della proliferazione in cellule di mammifero e di lievito mediante:

• Propidium Iodine
• Sytox
• BrdU
• EdU
• FUCCI
• Cicline
• Ki67 

• Assorbimento del glucosio (2NDBG) 
• Visualizzazione dei lipidi (Bodipy) e delle lipid droplets (Nile Red) 
• Funzionamento dei mitocondri (JC1, Mitotracker, Mitosox) 
• Rilevamento di proteine intracellulari (TMR HaloTag) 
• Rilevamento di specie reattive dell'ossigeno (CellRox, DFCDA) 
• Monitoraggio del rapporto ATP/ADP (sensore Perceval)

• Caspase3 
• AnnV\PI 
• DRAQ7

• Analisi di linee cellulari transdotte, trasfettate o ingegnerizzate con CRISPR/Cas9 o cellule primarie (umane e murine) 
• Detezione di proteine fluorescenti (GFP, RFP, mCherry, Scarlet, Tomato, YFP…) 
• Lineage tracking con marcatura RGB barcoding 
• Analisi dell'interazione proteica (kit Duolink flowPLA®) 
• Analisi dell'endocitosi cellulare (assorbimento di destrano) 
• Analisi dell'assorbimento di microplastiche in diverse linee cellulari e in tessuti murini 
• Quantificazione di antigen bound per cell (ABC) tramite QuantiBrite™ beads 

• Sorting bulk 
• Sorting su supporti speciali per successive analisi (vetrini per imaging, piastre da 96 wells per screening/sequenziamento/spettrometria di massa/high content imaging) 
• Sorting di singola cellula in piastre da 96 o 384 wells 
• Sorting con precauzioni particolari per analisi metabolomiche/analisi NGS